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  1. 2017.01.20 [실험] LB배지 만들기 (LB media)



 많은 종류의 배지가 있지만, 호기성 균주를 키우는데 있어서 많이 사용되는 배지에는 LB배지가 있습니다. LB배지는 Luria Bertani의 약자입니다.




 준비물


 Stirrer(교반기), beaker, spin bar(magnetic bar), spatula(약수저), mess cylinder, DDW(증류수),  microbalance(미량저울), weighing dish(무게다는 접시), weighing paper(무게다는  종이), yeast extract(효모 추출물), tryptone, NaCl(Sodium chloride), flask, test tube, autoclave




LB배지의 조성


1. Yeast extract

 효모 추출물이라고 하며, 효모를 건조시킨 뒤 갈아서 만든 제품입니다. 균이 자라는데 필요한 많은 영양소(탄소원, 아미노산, 비타민 등)를 가지고 있는 종합 영양분입니다.


2. Tryptone

 우유에서 나오는 casein의 분해에서 나온 산물을 peptone이라 하는데, 분해를 할때 trypcin을 사용하여 나온 peptone입니다. 많은 단백질을 함유하고 있으며 탄소원, 질소원으로 사용됩니다.


3. NaCl (sodium chloride)

 염으로 사용되는데, 이는 배지와 균 사이의 삼투를 조절하기 위해서 입니다. 균은 영양분이나 분자 등을 세포내로 수송할때 단순확산, 촉진확산(능동, 수동 수송) 등을 사용하는데, 이때 염이 삼투를 조절해 주는데 중요한 역할을 해줍니다.


4. Agar (한천)

 Agar는 흔히들 알고 있는 우뭇가사리에서 추출한 성분으로, 고체배지를 만들때 쓰입니다. agar의 녹는점은 60'C이고 굳는점은 40'C입니다.




LB배지의 제조


 먼저 비커안에 자석으로 된 magnetic bar와 DDW를 채워 교반기 위에 올린 뒤, 교반기 전원을 켜서 magnetic bar를 회전시킵니다.

 미량저울 위에 weighing dish 혹은 weighing paper를 올려놓고, TARE 혹은 ZERO라고 써있는 버튼을 눌러 무게를 0g으로 맞춥니다.

 이후 yeast extract 5g, tryptone 10g, NaCl 10g을 각각 재서 비커안에 넣어주고 DDW와 섞이게 해줍니다.

 Yeast extract, tryptone, NaCl이 섞여있는 broth를 사용한다면 25g을 재서 넣어주면 됩니다.

 다 섞인 수용액을 mess cylinder에 넣어주고 모자란만큼 DDW로 fill up해 줍니다.


fill up을 할 때에는 눈과 눈금의 위치가 일직선이 되어야 합니다.



 다시 beaker에 넣어 섞어준 뒤, flask 혹은 test tube에 알맞게 분주하여 autoclave로 습열멸균 해줍니다.



액체배지의 제조


 Flask는 크게 flask와 baffle flask가 있는데, baffle은 방해판이라는 뜻을 가지고 있고, 이는 shaking incubator로 배양을 할 경우 배지와 부딪혀 aeration이 잘 되게 도와주는 역할을 합니다.

 Autoclave는 높은 압력(1.2~1.3기압)과 고온(121'C)에서 15분 멸균하지만 멸균하는 물품이나, 원료 등에 따라 변동이 있을 수 있습니다.

 


고체배지의 제조


 고체배지를 만들 때는 agar, gelatin등이 사용되는데 agar가 많이 사용됩니다. 보통 1.5~2% 정도 첨가하며, 액체상태의 배지와 함께 autoclave를 통해 습열멸균과정을 거치며 녹여줍니다.

 멸균이 끝나면 꺼내어 교반기를 통해 잘 섞어준 뒤, petri dish에 부어주어 굳혀 사용합니다.

 항생제를 넣을 경우 배지의 온도가 높을 때 항생제를 넣으면 항생제가 변형되어 작용을 못할 수 있기 때문에 너무 뜨거울때는 넣지 않도록 합니다.




 다음에는 액체배지와 고체배지에서의 균 접종에 대해 알아보겠습니다.



 


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Posted by 안양_박건영