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  1. 2016.12.22 [실험] 형질전환 (Transformation)

 형질전환(transformation)은 recombinant plasmid DNA를 균주내로 넣어 균이 발현하는 형질을 변화시키는 기법입니다.


주로 사용하는 방법으로는 CaCl2기법과 electroporation이 있습니다.


CaCl2 Transformation


1. Comp. cell에 plasmid DNA를 넣습니다.

competant cell에 CaCl2가 들어있는데 여기서 Ca가 가지고 있는 +이온 2개가 - charge를 띄고 있는 plasmid와 cell membrane을 서로 붙게 만들어줍니다.


2. 4°C ice에 넣어 20min 동안 cold shock 시킵니다.

이때 plasmid와 cell이 서로 붙습니다.


3. 42°C 에서 90sec~120sec정도 heat shock 시킵니다.

이때 plasmid가 느슨해진 cell wall을 뚫고 들어갑니다.


4. 배지 1mL을 넣고 37°C 에서 1hr incubation합니다.


5. 알맞은 항생제가 들어있는 agar plate에 spreading합니다.


6. 37°C 에서 incubation합니다.



Electroporation

 먼저 electroporation은 전기적 자극을 주어 plasmid를 넣어주는 것이기 때문에, 일반적 comp. cell을 사용하면 효율적이지 못합니다.

 따라서 전용 comp. cell을 사용하거나 glycerol을 사용해 2회 정도 washing 해 준 뒤 사용합니다.


1. Electroporation cuvette에 cell과 plasmid를 넣어줍니다.


2. Cuvette을 끼워넣고 shock를 줍니다.


3. 배지 1mL을 넣고 37°C 에서 1hr incubation합니다.


5. 알맞은 항생제가 들어있는 agar plate에 spreading합니다.


6. 37°C 에서 incubation합니다.




Transformation은 recombination protein을 만드는데 있어 중요한 과정입니다.

Colony가 생기면 test tube에 picking하여 배양을 시작하면 됩니다.






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Posted by 안양_박건영

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